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人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA 试剂盒的操作步骤
时间:2022-08-08      阅读:192

人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA 试剂盒的操作步骤

背景[1-3]

人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA试剂盒用于测定血清,血浆及相关液体样本中胃蛋白酶原A(PG-A)的含量。


人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(elisa)的原理。往预先包被人胃蛋白酶原A(PG-A)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胃蛋白酶原A(PG-A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。



人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA试剂盒

标本要求

1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。


操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。


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